血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-凯发k8一触即发

简介

本方法使用创新型分体式hmr净化管/96孔板结合96孔正压固相萃取装置一步式净化血清样品，再通过lc-ms/ms进行检测，回收率达90%左右。样品处理过程简单，结果准确。

方法优势

ø 蛋白沉淀和磷脂去除一步完成，可有效去除血清中蛋白、磷脂类化合物对实验结果的影响

ø 通过式净化，极大简化前处理步骤，约1h即可完成前处理操作

ø 上样量仅需50μl，大大节省了宝贵的样品

ø 试剂耗材使用量更少，更加环保节约

ø 柱效远超直通式spe，回收率稳定，可达90％左右

配套设备及耗材

序号	产品名称	产品描述
1	96孔正压固相萃取装置	ez pre-96正压固相萃取装置
2	96孔氮吹仪	ez vap-96氮吹仪
3	双位96孔氮吹仪	ez vap-192双位96孔氮吹仪
4	mixmate® 混匀小精灵	mixmate®主机，不含样品管管架，230 v/50-60 hz（cn）
5	8道移液器	8-通道，10-100µl, 可调量程
6	超效分体96孔集成板hmr	hmr s-micro bio 96 well, 15mg, 1 ml, 1/pk
7	超效分体96孔spe板hmr	hmr s-micro bio spe, 15mg, 1 ml, 100/pk
8	超效96孔板微径小柱适配器	micro columnadapter rack，sus,1/pk
9	20种全氟混标（包含方法中15种全氟）	pfas mixture with 20 analytes, 5 µg/ml in methanol/water，1ml
10	11-氯-3-氧杂全氟十一烷磺酸钾	50 µg/ml，1ml，甲醇/水，cas：83329-89-9
11	13种全氟内标	mass-labelled pfc extraction standards solution 2.0μg/ml 1.2ml
12	血清中全氟质控品y2403	inspq pfc reference material y2403，1/kit
13	血清中全氟质控品y2301	inspq pfc reference material y2301，1/kit
14	血清中全氟质控品y2304	inspq pfc reference material y2304，1/kit
15	leosil c18/pfp核壳柱（gb23200.121方法专用）	leosil shell c18/pfp, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/pk
16	96孔收集板	collection plate, 1 ml/round/u-shaped, 96 well, 10/pk
17	封板膜	660 tape sealing pad for 96 well plate，25 sheets/pad，10pad/pk

样品前处理

仪器条件

1）色谱条件

色谱柱：leosil c18/pfp核壳柱 (2.7µm, 100* 2.1mm）

流动相：5mmol/l乙酸铵甲醇（a），5mmol/l乙酸铵水溶液（b）

流速：0.4ml/min

柱温：50℃

进样量：2μl

流动相梯度表

2）质谱条件

ab 6500 质谱检测器采用多反应检测模式（multiple

reaction monitoring，mrm），esi负离子模式。

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：负离子扫描；

检测方式：多反应离子监测（mrm）；

电喷雾电压：-4500v；

离子源温度：400℃；

辅助气1：60psi；

辅助气2：60psi；

气帘气：30psi；

碰撞气体：medium

目标pfass的离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下表

方法定量限

在以下两种方法中取最大值作为本项目的方法定量限（limit of quantification，loq）：（1）在实际血清基质中满足信噪比大于10的最低浓度，信噪比采用rms（root mean square，rms）方法；（2）标准曲线工作范围内满足实测浓度在理论值偏差±20％之内的最低浓度。由于本研究中样品未经浓缩和稀释，无稀释倍数，因此方法定量限即为loq，如下表。

16种pfass的定量限

回收率和精密度

血清中16种全氟化合物不同水平加标回收率和精密度（n=6）

实验注意事项

1、内标体积太小（50、20微升），稍微有损失，就会影响定量，所以建议先加样品、再加内标，最后加乙腈；

2、加液体过程中，一定注意尽量让移液枪的枪头接近净化管中最上层筛板加液。需要正确使用移液枪，特别是小体积加样时；

3、建议分两次加入乙腈。如果只加一次乙腈，可能洗脱不完全，净化管里有残留。压完一次，加入乙腈，再正压；

4、乙腈：血清的比例从3：1开始优化；

5、其他项目根据化合物的性质选择甲醇或乙腈作为提取溶剂。